海能儀器：植物中粗脂肪的測定（粗脂肪法）

 脂肪是各種脂肪酸的甘油三酸脂，植物中脂肪是各種甘油三酸脂的混合物。雖然各種脂肪酸的不飽和性，碳鏈長短以及結(jié)構(gòu)等不相同，但其共同點是不溶于水而易溶于許多有機溶劑中。因此可用有機溶劑(沸點34.5℃或石油醚沸程為30—60℃等)。用試樣的失重(殘余法)來測定脂肪含量。浸提時除脂肪外還包括一些類脂如脂肪酸、磷脂，糖脂以及脂溶性色素和維生素等，故稱為“粗脂肪”。本實驗除了介紹谷物、油料作物種子(1983)和飼料(1987)中粗脂肪測定的國家標(biāo)準(zhǔn)油重法(使用索氏浸提器)外，還介紹了適用于大批樣同時測定的殘余法。

1 油重法(索氏提取法)

原理：

    油重法的原理是將樣品置于索氏脂肪抽提器中，反復(fù)經(jīng)(或石油醚)抽提，使脂肪*溶解于溶劑中，然后加熱除去溶劑，稱重，即可算出樣品中粗脂肪百分含量。由于樣品中類脂物質(zhì)亦溶解于此溶劑中，故稱粗脂肪含量，也是標(biāo)準(zhǔn)推薦法，仲裁時以此油重法為準(zhǔn)。本法所得結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定，其缺點是費時，一般須10小時以上，而且一套儀器只能測定一個樣品，不適于大批樣品的分析。

主要儀器：

   (1)分析天平：感量0.0001g

   (2)粉碎機、研缽、切片機

   (3)電熱式恒溫水浴：(6或8孔式)。

   (4)烘箱。

   (5)濾紙筒：直徑22mm,長100mm。

   (6)裝有變色硅膠的干燥器。。

試劑 ：

無水：化學(xué)純。

操作步驟：

    (1)樣品的選取和制備：選取有代表性的油料種子，揀出雜質(zhì)，按四分法縮減取樣。小粒種子，如芝麻、油菜等，取樣量不得少于25g；大粒種子如大豆、花生仁等，取樣量不得少于30g。大豆經(jīng)105±2℃烘干1小時后取出，放入干燥器內(nèi)冷卻至室溫。粉碎，并通過40目篩；花生仁切碎。帶殼油料種子，如花生果，蓖麻籽，向日葵籽等，需將殼與籽粒分開，分別稱量，計算出仁率。然后測定籽粒的油分。制備完畢，立即混合均勻，裝入磨口瓶中備用。

    (2)研磨與稱樣：稱取備用樣品2—4g兩份，(含油0.7—1.0g)，準(zhǔn)確至0.001g。置105±2℃烘箱中干燥1小時，取出，放入干燥器內(nèi)冷卻至室溫。同時測試樣的水分。將試樣在研缽內(nèi)研細(xì)，必要時加適量純石英砂研磨，用牛角勺將研細(xì)的試樣移入已干燥的濾紙筒，取少量脫脂棉蘸擦凈研缽、研桿和牛角勺上的樣品和油跡，一并投入濾紙筒內(nèi)(大豆已預(yù)先烘干粉碎可直接稱樣裝筒)，在試樣面層塞以脫脂棉，以防樣品損失，將濾紙筒投入抽提管內(nèi)。每個抽提器只放一個單樣。

    (3)在裝有2—3粒沸石并已烘至恒重的潔凈的抽提瓶內(nèi)，加入約瓶體積1/2的無水，把抽提器各部分連接起來，連接好冷凝水流，調(diào)節(jié)水浴溫度，使冷凝下滴的速度180滴/分(水浴溫度約在55℃以下，(注)一般條件下只用45—50℃，120滴/分比較安全。)，谷物、大豆樣品抽提8小時，一般油料抽提10小時，有些含油量很高的油料種子，應(yīng)延長抽提時間，直到抽提管內(nèi)的用濾紙試驗無油跡時為止。

    (4)抽提完畢后，從抽提管中取出濾紙筒，再連接好抽提器，在水浴上蒸餾回收抽取瓶中的。然后取出抽提瓶，在沸水浴上蒸去殘余的。

    (5)將盛有粗脂肪的抽提瓶放入105±2℃烘箱中烘干1小時，放入干燥器中冷卻至室溫(約45—60分鐘)后稱重，準(zhǔn)確至0.0001g，再烘30分鐘，冷卻、稱重，直至恒重。抽提瓶增加的重量即為粗脂肪的重量。抽出的油應(yīng)是清亮的，否則應(yīng)重做。

結(jié)果計算：

    粗脂肪%(干基)=粗脂肪重(g)/試樣重(g)×100

    帶殼的油料種子粗脂肪%=子仁粗脂肪×出仁率%

    平行測定的結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留小數(shù)點后兩位。平行測定結(jié)果的相對誤差。大豆不得大于2%，油料作物種子不得大于1%

2 殘余法

原理

    殘余法是基于樣品經(jīng)溶劑反復(fù)抽提后，使全部脂肪除去，再從樣品剩余的殘渣量計算出粗脂肪含量。

主要儀器

    (1)索氏型脂肪抽提器。

    (2)樣品篩：20目、40目各一個。

    (3)稱樣瓶：直徑3.5cm，高7cm。

    (4)培養(yǎng)皿：直徑11—13cm。

    (5)濾紙：中速或慢速。

    (6)乳膠手套或白紗手套。

其他儀器與試劑同上節(jié)4—5.1

操作步驟

    (1)樣品的選取和制備：選取具有代表性的谷物或油料種子，揀出雜質(zhì)，按四分法縮減取樣。小粒種子如油菜、芝麻等取樣量不得少于10g;大粒種子，如大豆、花生仁等取樣量不得少于15g；谷物種子取樣量不少于5g。將樣品預(yù)先在80℃烘箱中干燥約2小時，以便制備樣品。谷類、大豆、油沙豆經(jīng)粉碎后，95%通過40目篩；油菜籽、胡麻籽、紅花種子經(jīng)粉碎后，95%通過20目篩；花生仁、蓖麻仁等用切片或小刀切成0.5mm以下薄片。芝麻用碾磨機或研缽細(xì)心磨碎，注意不要留有整粒，向日葵種子經(jīng)剝殼后，子仁粉碎至均勻粉狀。樣品處理完畢，立即混合均勻，裝入磨口瓶中備用。

    (2)將濾紙裁成7×7cm大小(谷類可增大些)，并疊成一端不封口的紙包，用鉛筆編號碼，順序排列在培養(yǎng)皿中，每皿10—20包，然后將放好濾紙包的培養(yǎng)皿放入105℃±2℃烘箱中干燥2小時，取出放入干燥器中冷卻至室溫，分別將各包放入同一個稱量瓶中稱重(a)(注1)

    (3)用牛角勺將已制備好的樣品小心地裝入濾紙包中(注2)，谷物3—5g，油料1g左右，封上包口，并按原順序號排列在培養(yǎng)皿中，放入105±2℃烘箱中，干燥3小時，然后放入干燥器中冷卻至室溫，分別將各包在原稱量瓶中稱量(b)， (注3)。